Día 12: Finalizamos el Western

Lavamos la placa con TBS Tween

Se lo dejo en "remojo" 1 hora y media, en una solución de 5% suero (750ul), 15ml TBS tween 0,1%, anticuerpo (1 en 15000 (1ul))

Volvimos a lavar la placa y finalmente la revelamos, se pudieron observar las bandas esperadas comprobando un buen trabajo.

Día 11: Empezamos un Western

Para conocer la técnica y saber como aplicarla en el futuro, empezamos a realizar un Western-blot. La técnica diferencia proteínas por su peso molecular, es, básicamente, una electroforesis especializada para proteínas.
Empezamos armando el gel de poliacrilamida en presencia de SDS, una diferencia con el Northren-blot es que, a diferencia del Northren que es horizontal, esta corrida se hace en vertical.

Primero necesitamos saber la concentración de nuestras muestras, para esto tomamos albúmina (una proteína muy común) y realizamos una curva de calibración, que nos permite saber la concentración en función de la absorvancia. Una vez obtenidas la concertación de la muestras, tomamos los ml necesarios para que en cada calle halla 50ug de proteínas totales.
Al finalizar la corrida, se coloca una membrana PVDF encima del gel, y se le hace pasar corriente eléctrica al igual que en la corrida, solo que esta vez las muestras, en vez de avanzar por las calles, pasan del gel a la membrana.

Una vez en la membrana, lo lavamos con TBS Tween 0,1%, luego se la bloquea, para que los anticuerpos no se unan a sitios inespecificos, y se pone el anticuerpo primario overnight.

Día 10: Conceptos

Dedicamos este dia a hacer una repaso de lo que habiamos echo, y conversar sobre lo que vamos a hacer, poniendo en claro ciertos puntos oscuros y corrigiendo errores de concepto. Se decidio que debiamos conocer la técnica de Western-Blot y, por lo tanto, realizaremos una la semana que viene.

Día 8: Sala de Cultivo

Para conocer mas la parte del proyecto en que nosotros no estamos trabajando, fuimos al laboratorio de cultivo, en el cual se trabaja en esterilidad.

Con un cultivo mas viejo, realizamos tres nuevos. Para esto primero tuvimos que "despegar" los fibroblastos del envase, ya que estos se "pegan" a las supercies. Luego, con medio de cultivo nuevo, sembramos bacterias en tres nuevos envases, esto fue despues de separar las bacterias del resto del medio, centrifugamos las muestras y tomando el pellet.

Finalmente las dejamos cultivando.